UltraPath – Système pour la détermination in cellulo de l’ultrastructure des interactions dynamiques hôte-pathogène

Les agents pathogènes envahissent les cellules hôtes pour établir des niches et se propager via une interaction complexe entre l’agent pathogène et la cellule hôte. Les déterminants moléculaires et cellulaires de ces événements hautement dynamiques sont principalement étudiés par microscopie fluorescente à haute résolution qui ne peut pas distinguer les molécules individuelles.

Les nouveaux systèmes cryo-EM (cryo-FIB/SEM suivi d’une tomographie), fournissent des informations ultrastructurelles in cellulo dans un état proche de l’état natif. Les projets de cryo-EM peuvent être facilités par 6 marqueurs fluorescents spécifiques grâce aux systèmes de cryo-CLEM (cryo-Correlative Light Electron Microscopy) qui fournissent des informations structurelles et fonctionnelles sur les agents pathogènes intracellulaires dans leur environnement cellulaire natif. Le haut débit et la reproductibilité restent le goulot d’étranglement pour les projets cryo-CLEM.

UltraPath utilise le mode de vie intracellulaire de Shigella flexneri et de Legionella pneumophila chez les personnes infectées ainsi que d’autres modèles importants de pathogènes tels que le nouveau SARS-CoV-2 et le transport de cellules de protéines amyloïdes pathogènes comme modèle de preuve de concept pour surmonter les principaux goulots d’étranglement des cryo-CLEM. Cela permettra à la communauté scientifique de disposer d’un système fiable combinant la microscopie optique à résolution sur des cellules structurées, le broyage et la tomographie automatisés par cryo-FIB.